സെൽ കൾച്ചർ പരിസ്ഥിതി കോശ ഉത്പാദനത്തെ ബാധിക്കുന്നു

കോശങ്ങളുടെ പുനരുൽപാദനത്തിന്റെ ഭൗതിക രസതന്ത്രം (അതായത് താപനില, pH, ഓസ്മോട്ടിക് മർദ്ദം, O2, CO2 ടെൻഷൻ), ശാരീരിക അന്തരീക്ഷം (അതായത് ഹോർമോണും പോഷകങ്ങളുടെ സാന്ദ്രതയും) കൈകാര്യം ചെയ്യാനുള്ള കഴിവാണ് സെൽ കൾച്ചറിന്റെ പ്രധാന നേട്ടങ്ങളിലൊന്ന്.താപനില കൂടാതെ, വളർച്ചാ മാധ്യമമാണ് സംസ്കാര പരിസ്ഥിതി നിയന്ത്രിക്കുന്നത്.

സംസ്കാരത്തിന്റെ ഫിസിയോളജിക്കൽ പരിതസ്ഥിതി അതിന്റെ ഭൗതികവും രാസപരവുമായ അന്തരീക്ഷം പോലെ വ്യക്തമല്ലെങ്കിലും, സെറം ഘടകങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള മികച്ച ധാരണ, വ്യാപനത്തിന് ആവശ്യമായ വളർച്ചാ ഘടകങ്ങളെ തിരിച്ചറിയൽ, സംസ്കാരത്തിലെ കോശങ്ങളുടെ സൂക്ഷ്മപരിസ്ഥിതിയെക്കുറിച്ചുള്ള മികച്ച ധാരണ.(അതായത് സെൽ-സെൽ ഇന്ററാക്ഷൻ, ഗ്യാസ് ഡിഫ്യൂഷൻ, മാട്രിക്സുമായുള്ള ഇടപെടൽ) ഇപ്പോൾ ചില സെൽ ലൈനുകളെ സെറം ഫ്രീ മീഡിയയിൽ കൾച്ചർ ചെയ്യാൻ അനുവദിക്കുന്നു.

1.സംസ്കാര പരിസ്ഥിതി കോശവളർച്ചയെ ബാധിക്കുന്നു
ഓരോ സെൽ തരത്തിനും സെൽ കൾച്ചർ അവസ്ഥ വ്യത്യസ്തമാണെന്ന കാര്യം ശ്രദ്ധിക്കുക.
ഒരു പ്രത്യേക സെൽ തരത്തിന് ആവശ്യമായ സംസ്‌കാര വ്യവസ്ഥകളിൽ നിന്ന് വ്യതിചലിക്കുന്നതിന്റെ അനന്തരഫലങ്ങൾ അസാധാരണമായ പ്രതിഭാസങ്ങളുടെ ആവിഷ്‌കാരം മുതൽ സെൽ കൾച്ചറിന്റെ സമ്പൂർണ്ണ പരാജയം വരെ നീളുന്നു.അതിനാൽ, നിങ്ങൾക്ക് താൽപ്പര്യമുള്ള സെൽ ലൈനുമായി പരിചയപ്പെടാനും നിങ്ങളുടെ പരീക്ഷണത്തിൽ നിങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഓരോ ഉൽപ്പന്നത്തിനും നൽകിയിരിക്കുന്ന നിർദ്ദേശങ്ങൾ കർശനമായി പാലിക്കാനും ഞങ്ങൾ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

2. നിങ്ങളുടെ സെല്ലുകൾക്കായി ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്ത സെൽ കൾച്ചർ അന്തരീക്ഷം സൃഷ്ടിക്കുന്നതിനുള്ള മുൻകരുതലുകൾ:
കൾച്ചർ മീഡിയയും സെറവും (കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക് താഴെ കാണുക)
pH, CO2 ലെവലുകൾ (കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക് താഴെ കാണുക)
പ്ലാസ്റ്റിക് കൃഷി ചെയ്യുക (കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക് താഴെ കാണുക)
താപനില (കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക് താഴെ കാണുക)

2.1 കൾച്ചറൽ മീഡിയയും സെറവും
സംസ്കാര അന്തരീക്ഷത്തിന്റെ ഏറ്റവും പ്രധാനപ്പെട്ട ഭാഗമാണ് സംസ്കാര മാധ്യമം, കാരണം ഇത് കോശ വളർച്ചയ്ക്ക് ആവശ്യമായ പോഷകങ്ങളും വളർച്ചാ ഘടകങ്ങളും ഹോർമോണുകളും നൽകുന്നു, കൂടാതെ സംസ്കാരത്തിന്റെ പി.എച്ച്, ഓസ്മോട്ടിക് മർദ്ദം എന്നിവ നിയന്ത്രിക്കുന്നു.

ടിഷ്യൂ സത്തിൽ നിന്നും ശരീരദ്രവങ്ങളിൽ നിന്നും ലഭിച്ച പ്രകൃതിദത്ത മാധ്യമങ്ങൾ ഉപയോഗിച്ചാണ് പ്രാരംഭ സെൽ കൾച്ചർ പരീക്ഷണങ്ങൾ നടത്തിയതെങ്കിലും, സ്റ്റാൻഡേർഡൈസേഷന്റെ ആവശ്യകത, മീഡിയ നിലവാരം, വർദ്ധിച്ച ഡിമാൻഡ് എന്നിവ നിർണായക മാധ്യമങ്ങളുടെ വികാസത്തിലേക്ക് നയിച്ചു.ബേസൽ മീഡിയ, കുറഞ്ഞ സെറം മീഡിയ, സെറം ഫ്രീ മീഡിയ എന്നിവയാണ് മൂന്ന് അടിസ്ഥാന തരം മീഡിയകൾ, കൂടാതെ സെറം സപ്ലിമെന്റേഷനായി അവയ്ക്ക് വ്യത്യസ്ത ആവശ്യകതകളുണ്ട്.

2.1.1 അടിസ്ഥാന മാധ്യമം
ഗിബ്‌കോ സെൽ കൾച്ചർ മീഡിയം
അമിനോ ആസിഡുകൾ, വിറ്റാമിനുകൾ, അജൈവ ലവണങ്ങൾ, കാർബൺ സ്രോതസ്സുകൾ (ഗ്ലൂക്കോസ് പോലുള്ളവ) എന്നിവ അടങ്ങിയ അടിസ്ഥാന മാധ്യമങ്ങളിൽ മിക്ക സെൽ ലൈനുകളും നന്നായി വളരുന്നു, എന്നാൽ ഈ അടിസ്ഥാന മീഡിയ ഫോർമുലേഷനുകൾ സെറം ഉപയോഗിച്ച് അനുബന്ധമായി നൽകണം.

2.1.2 സെറം മീഡിയം കുറച്ചു
ഗിബ്‌കോ ലോ സെറം മീഡിയം ഉള്ള കുപ്പി
സെൽ കൾച്ചർ പരീക്ഷണങ്ങളിൽ സെറത്തിന്റെ പ്രതികൂല ഫലങ്ങൾ കുറയ്ക്കുന്നതിനുള്ള മറ്റൊരു തന്ത്രമാണ് സെറം-കുറച്ച മീഡിയ ഉപയോഗിക്കുന്നത്.കുറഞ്ഞ സെറം മീഡിയം പോഷകങ്ങളും മൃഗങ്ങളിൽ നിന്നുള്ള ഘടകങ്ങളും അടങ്ങിയ ഒരു അടിസ്ഥാന മീഡിയം ഫോർമുലയാണ്, ഇത് ആവശ്യമായ സെറത്തിന്റെ അളവ് കുറയ്ക്കും.

2.1.3 സെറം രഹിത മീഡിയം
ഗിബ്‌കോ സെറം രഹിത മീഡിയം ഉള്ള കുപ്പി
സെറം-ഫ്രീ മീഡിയം (SFM) ഉചിതമായ പോഷകാഹാരവും ഹോർമോൺ ഫോർമുലേഷനുകളും ഉപയോഗിച്ച് സെറം മാറ്റി മൃഗങ്ങളുടെ സെറം ഉപയോഗിക്കുന്നത് ഒഴിവാക്കുന്നു.ചൈനീസ് ഹാംസ്റ്റർ ഓവറി (CHO) റീകോമ്പിനന്റ് പ്രോട്ടീൻ പ്രൊഡക്ഷൻ ലൈൻ, വിവിധ ഹൈബ്രിഡോമ സെൽ ലൈനുകൾ, ഷഡ്പദ ലൈനുകൾ Sf9, Sf21 (Spodoptera frugiperda), കൂടാതെ വൈറസ് ഉൽപ്പാദനത്തിനുള്ള ഹോസ്റ്റ് എന്നിവയുൾപ്പെടെ പല പ്രാഥമിക സംസ്ക്കാരങ്ങളിലും സെൽ ലൈനുകളിലും സെറം രഹിത മീഡിയം ഫോർമുലേഷനുകൾ ഉണ്ട്. (ഉദാഹരണത്തിന്, 293, VERO, MDCK, MDBK), മുതലായവ. സെറം രഹിത മീഡിയം ഉപയോഗിക്കുന്നതിന്റെ പ്രധാന നേട്ടങ്ങളിലൊന്ന്, വളർച്ചാ ഘടകങ്ങളുടെ ഉചിതമായ സംയോജനം തിരഞ്ഞെടുത്ത് പ്രത്യേക സെൽ തരങ്ങൾക്കായി മീഡിയം തിരഞ്ഞെടുക്കാനുള്ള കഴിവാണ്.സെറം രഹിത മീഡിയയുടെ ഗുണങ്ങളും ദോഷങ്ങളും ഇനിപ്പറയുന്ന പട്ടിക പട്ടികപ്പെടുത്തുന്നു.

പ്രയോജനം
വ്യക്തത വർദ്ധിപ്പിക്കുക
കൂടുതൽ സ്ഥിരതയുള്ള പ്രകടനം
എളുപ്പമുള്ള ശുദ്ധീകരണവും ഡൗൺസ്ട്രീം പ്രോസസ്സിംഗും
സെൽ പ്രവർത്തനം കൃത്യമായി വിലയിരുത്തുക
ഉൽപ്പാദനക്ഷമത വർദ്ധിപ്പിക്കുക
ഫിസിയോളജിക്കൽ പ്രതികരണങ്ങളുടെ മികച്ച നിയന്ത്രണം
മെച്ചപ്പെടുത്തിയ സെൽ മീഡിയ കണ്ടെത്തൽ
ദോഷം
സെൽ തരം നിർദ്ദിഷ്ട മീഡിയം ഫോർമുല ആവശ്യകതകൾ
ഉയർന്ന റീജന്റ് പ്യൂരിറ്റി ആവശ്യമാണ്
വളർച്ചയുടെ മന്ദത

2.2.1 pH നില
സാധാരണ സസ്തനികളിലെ മിക്ക സെൽ ലൈനുകളും pH 7.4-ൽ നന്നായി വളരുന്നു, വ്യത്യസ്ത സെൽ ലൈനുകൾ തമ്മിലുള്ള വ്യത്യാസം ചെറുതാണ്.എന്നിരുന്നാലും, രൂപാന്തരപ്പെട്ട ചില സെൽ ലൈനുകൾ അൽപ്പം അസിഡിറ്റി ഉള്ള അന്തരീക്ഷത്തിൽ (pH 7.0 - 7.4) നന്നായി വളരുന്നതായി കാണിക്കുന്നു, അതേസമയം ചില സാധാരണ ഫൈബ്രോബ്ലാസ്റ്റ് സെൽ ലൈനുകൾ അൽപ്പം ആൽക്കലൈൻ അന്തരീക്ഷം ഇഷ്ടപ്പെടുന്നു (pH 7.4 - 7.7).Sf9, Sf21 പോലുള്ള പ്രാണികളുടെ കോശരേഖകൾ pH 6.2-ൽ നന്നായി വളരുന്നു.

2.2.2 CO2 ലെവൽ
വളർച്ചാ മാധ്യമം സംസ്കാരത്തിന്റെ pH നിയന്ത്രിക്കുകയും pH-ലെ മാറ്റങ്ങളെ പ്രതിരോധിക്കാൻ സംസ്കാരത്തിലെ കോശങ്ങളെ ബഫർ ചെയ്യുകയും ചെയ്യുന്നു.സാധാരണയായി, ഓർഗാനിക് (ഉദാഹരണത്തിന്, HEPES) അല്ലെങ്കിൽ CO2-ബൈകാർബണേറ്റ് അടിസ്ഥാനമാക്കിയുള്ള ബഫറുകൾ അടങ്ങിയതാണ് ഈ ബഫറിംഗ്.മാധ്യമത്തിന്റെ പി.എച്ച് അലിഞ്ഞുചേർന്ന കാർബൺ ഡൈ ഓക്സൈഡിന്റെയും (CO2) ബൈകാർബണേറ്റിന്റെയും (HCO3-) സൂക്ഷ്മമായ സന്തുലിതാവസ്ഥയെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നതിനാൽ, അന്തരീക്ഷ CO2-ലെ മാറ്റങ്ങൾ മാധ്യമത്തിന്റെ pH-നെ മാറ്റും.അതിനാൽ, CO2-ബൈകാർബണേറ്റ് അധിഷ്‌ഠിത ബഫർ ഉപയോഗിച്ച് ബഫർ ചെയ്‌ത ഒരു മീഡിയം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ, എക്‌സോജനസ് CO2 ഉപയോഗിക്കേണ്ടത് ആവശ്യമാണ്, പ്രത്യേകിച്ചും ഓപ്പൺ കൾച്ചർ വിഭവങ്ങളിൽ സെല്ലുകൾ സംസ്‌കരിക്കുമ്പോഴോ ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിൽ രൂപാന്തരപ്പെട്ട സെൽ ലൈനുകൾ സംസ്‌കരിക്കുമ്പോഴോ.മിക്ക ഗവേഷകരും സാധാരണയായി വായുവിൽ 5-7% CO2 ഉപയോഗിക്കുന്നുണ്ടെങ്കിലും, മിക്ക സെൽ കൾച്ചർ പരീക്ഷണങ്ങളും സാധാരണയായി 4-10% CO2 ഉപയോഗിക്കുന്നു.എന്നിരുന്നാലും, ശരിയായ pH ഉം ഓസ്മോട്ടിക് മർദ്ദവും കൈവരിക്കുന്നതിന് ഓരോ മാധ്യമത്തിനും ശുപാർശ ചെയ്യുന്ന CO2 ടെൻഷനും ബൈകാർബണേറ്റ് സാന്ദ്രതയും ഉണ്ട്;കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ഇടത്തരം നിർമ്മാതാവിന്റെ നിർദ്ദേശങ്ങൾ പരിശോധിക്കുക.

2.3 പ്ലാസ്റ്റിക്ക് കൃഷി
വിവിധ സെൽ കൾച്ചർ ആപ്ലിക്കേഷനുകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ രീതിയിൽ സെൽ കൾച്ചർ പ്ലാസ്റ്റിക്കുകൾ വിവിധ രൂപങ്ങളിലും വലിപ്പങ്ങളിലും പ്രതലങ്ങളിലും ലഭ്യമാണ്.നിങ്ങളുടെ സെൽ കൾച്ചർ ആപ്ലിക്കേഷനായി ശരിയായ പ്ലാസ്റ്റിക് തിരഞ്ഞെടുക്കാൻ സഹായിക്കുന്നതിന് ചുവടെയുള്ള സെൽ കൾച്ചർ പ്ലാസ്റ്റിക് സർഫേസ് ഗൈഡും സെൽ കൾച്ചർ കണ്ടെയ്‌നർ ഗൈഡും ഉപയോഗിക്കുക.
എല്ലാ തെർമോ സയന്റിഫിക് Nunc സെൽ കൾച്ചർ പ്ലാസ്റ്റിക്കുകളും കാണുക (പരസ്യ ലിങ്ക്)

2.4 താപനില
സെൽ കൾച്ചറിനുള്ള ഒപ്റ്റിമൽ ഊഷ്മാവ്, കോശങ്ങൾ വേർപെടുത്തിയിരിക്കുന്ന ആതിഥേയന്റെ ശരീര താപനിലയെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു, കൂടാതെ ഒരു പരിധിവരെ താപനിലയിലെ ശരീരഘടനാപരമായ മാറ്റങ്ങളെ ആശ്രയിച്ചിരിക്കുന്നു (ഉദാഹരണത്തിന്, ചർമ്മത്തിന്റെ താപനില എല്ലിൻറെ പേശികളേക്കാൾ കുറവായിരിക്കാം. ).സെൽ കൾച്ചറിനെ സംബന്ധിച്ചിടത്തോളം, അമിതമായി ചൂടാകുന്നതിനേക്കാൾ ഗുരുതരമായ പ്രശ്‌നമാണ് അമിത ചൂടാക്കൽ.അതിനാൽ, ഇൻകുബേറ്ററിലെ താപനില സാധാരണയായി ഒപ്റ്റിമൽ താപനിലയേക്കാൾ അല്പം താഴെയാണ്.

2.4.1 വിവിധ സെൽ ലൈനുകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ താപനില
ഒപ്റ്റിമൽ വളർച്ചയ്ക്കായി മിക്ക മനുഷ്യരുടെയും സസ്തനികളുടെയും കോശരേഖകൾ 36 ° C മുതൽ 37 ° C വരെ നിലനിർത്തുന്നു.
ഒപ്റ്റിമൽ വളർച്ചയ്ക്കായി പ്രാണികളുടെ കോശങ്ങൾ 27 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ കൃഷി ചെയ്യുന്നു;താഴ്ന്ന താപനിലയിലും 27 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനും 30 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനും ഇടയിലുള്ള ഊഷ്മാവിൽ അവ സാവധാനത്തിൽ വളരുന്നു.30 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിനു മുകളിൽ, പ്രാണികളുടെ കോശങ്ങളുടെ ജീവശക്തി കുറയുന്നു, അത് 27 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ തിരിച്ചെത്തിയാലും കോശങ്ങൾ വീണ്ടെടുക്കില്ല.
ഏവിയൻ സെൽ ലൈനുകൾക്ക് പരമാവധി വളർച്ച കൈവരിക്കാൻ 38.5 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസ് ആവശ്യമാണ്.ഈ കോശങ്ങൾ 37 ഡിഗ്രി സെൽഷ്യസിൽ സൂക്ഷിക്കാമെങ്കിലും അവ സാവധാനത്തിൽ വളരും.
തണുത്ത രക്തമുള്ള മൃഗങ്ങളിൽ നിന്ന് (ഉഭയജീവികൾ, തണുത്ത ജല മത്സ്യം പോലുള്ളവ) ഉരുത്തിരിഞ്ഞ സെൽ ലൈനുകൾക്ക് 15 ° C മുതൽ 26 ° C വരെയുള്ള വിശാലമായ താപനിലയെ സഹിക്കാൻ കഴിയും.